乳酸( lactate)是糖代谢的中间产物，主要来源于骨骼肌、脑、皮肤、肾髓质和红细胞。血液中乳酸浓度和这些组织产生乳酸的速率以及肝脏对乳酸的代谢速度有关，约65%的乳酸由肝脏代谢。测定血浆中的乳酸浓度对乳酸性酸中毒有重要的诊断意义。

乳酸的测定有酶催化法、化学氧化法、电化学法和酶电极感应器法，后三种均为化学法。化学法操作复杂，影响因素多，而酶催化法灵敏度高，线性范围宽且适用于自动化分析仪，是乳酸测定较理想的常用方法。

在NAD ⁺存在时，乳酸脱氢酶催化乳酸氧化成丙酮酸，同时生成NADH:

在pH 9.8时，平衡偏向乳酸氧化成丙酮酸。加入肼或氨基脲与丙酮酸生成复合物，使丙酮酸不断从反应体系中减少，促使反应向右进行。在紫外可见分光光度计波长340nm处监测吸光度的升高速率，计算乳酸含量。

1. Tris-EDTA-肼缓冲液(浓度分别为499mmol/L、 11.9mmol/L和226mmol/L)　溶解Tris 60.5g和EDTA-Na ₂4g于约800ml蒸馏水中，加水合肼11ml，用盐酸或氧氧化钠溶液调节pH至9.8，再用蒸馏水稀释至1L。放4℃冰箱中保存，可稳定6个月。

2. NAD溶液　预先称取数份β-NAD ( MW 663.4) 66.3mg置于试管中，塞紧，放冰箱中保存，至少稳定1个月。临用前，取出1管加入蒸馏水3ml溶解NAD。

3.乳酸脱氢酶溶液　纯化的兔肌LDH硫酸铵悬液，比活性约550U/mg。

4.底物应用液　取Tris-EDTA-肼缓冲液27ml，NAD溶液3ml，乳酸脱氢酶溶液40μl混匀。置4℃可稳定24小时。

5.20mmol/L乳酸标准液　称取192mg/L乳酸锂标准品溶于100ml蒸馏水中。置4℃可稳定6个月。

6.乳酸标准应用液( 2mmol/L和5mmol/L) 20mmol/L乳酸标准液用蒸馏水分别稀释成2mmol/L 和5mmol/L乳酸标准应用液。置4℃保存可稳定2个月。

取15mm×100mm试管3支，分别编号为“测定管”、“标准管”及“空白管”，按表2-2-4进行操作。

表2-2-4中各管立即混匀后，置37℃水浴准确保温5分钟，各管立即加入0.1mol/L盐酸3ml终止反应。紫外可见分光光度计波长340nm，比色杯光径1.0cm，用蒸馏水调零，读取测定管、对照管、标准管和空白管的吸光度。

同“(一)手工检测”。

不同实验室具体反应条件会因所使用的仪器和试剂而异，在保证方法可靠的前提下，应按仪器和试剂说明书设定测定条件，进行定标品、质控样品和血浆样品分析。

1.标本类型　抗凝剂要选择肝素-氟化钠，尽快分离出血浆。因草酸钾对乳酸脱氢酶有一定的抑制作用，故不能选择草酸钾/氟化钠作为抗凝剂。

2.采血前准备　为避免分析前其他因素对乳酸检测结果的影响，患者在采血前应保持空腹和完全静息至少2小时，以使血中乳酸浓度达到稳态。

3.可用氯化硝基四氮唑蓝( NBT)呈色法测定NADH的生成量。在酚嗪二甲酯硫酸盐( PMS)的存在下，使NADH的氢传递给NBT，还原生成紫红色的物质，再进行比色测定。

4.本法测定时，样本中的乳酸含量与NADH的生成量呈等摩尔关系。因此，可以根据NADH的摩尔吸光度(ε= 6220)来直接计算乳酸的浓度。但是，仪器必须校准，反应条件必须标准化，必须与标准管法进行比对实验，证明结果准确。

安静状态下，成年人空腹静脉血乳酸浓度: 0.6～2.2mmol/L。动脉血中乳酸水平为静脉血中乳酸水平的1/2～2/3。餐后乳酸水平比基础空腹值高20%～50%。新生儿毛细血管血中的乳酸水平比成年人平均高50%。

血浆乳酸升高可见于:

剧烈运动或脱水。

( 1)休克、心力衰竭、血液病和肺功能不全时出现组织严重缺氧，导致丙酮酸还原成乳酸的酵解作用增加，促使乳酸水平升高。

( 2)某些肝脏疾病时由于肝脏对乳酸的清除率减低，可出现血乳酸升高。

( 3)糖尿病患者胰岛素绝对或(和)相对不足，机体不能有效利用血糖，丙酮酸大量还原成乳酸，导致体内乳酸堆积，出现乳酸酸中毒。

( 4)服用某些药物或毒物(如乙醇、甲醇、水杨酸等)亦可引起血乳酸增高。